如何做好生物制藥公司的滅菌設(shè)備驗證

一、 法規(guī)要求

GMP指南（無菌藥品）

GB8599-2008大型蒸汽滅菌器技術(shù)要求自動控制型

藥品生產(chǎn)驗證指南2003

二、 內(nèi)容

1.GMP指南（無菌藥品）

博維-狄克實驗（BD實驗）、氣密性實驗、空載熱分布測試、滿載熱分布和熱穿透實驗、微生物挑戰(zhàn)性實驗、呼吸器的評估、在驗證等。

2.GB8599-2008大型蒸汽滅菌器技術(shù)要求-自動控制型

蒸汽滲透（BD實驗）、橡膠負(fù)載的滅菌效果、溫度參數(shù)、滿負(fù)載溫度、真空泄露。

3.藥品生產(chǎn)驗證指南2003

概況、生物指示劑選用、F0值選擇、空載狀態(tài)熱分布、裝載熱穿透實驗、生物指示劑驗證。

三、 標(biāo)準(zhǔn)

1.GMP指南（無菌藥品）

1.1博維-狄克實驗（BD實驗）

內(nèi)部指示卡色條呈現(xiàn)均勻變色

1.2氣密性實驗

不應(yīng)超出1.3kPa/10min

1.3空載熱分布測試

無硬性標(biāo)準(zhǔn)，考察設(shè)備本身性能變化滿載熱分布與空載熱分布相同：同一時刻各點之間的差值應(yīng)不超過2度。

1.4滿載熱分布和熱穿透實驗

F0值大于12。

1.5微生物挑戰(zhàn)性實驗

滅菌程序可以實現(xiàn)10-6的存活概率。

2.GB8599-2008大型蒸汽滅菌器技術(shù)要求-自動控制型

2.1蒸汽滲透（BD實驗）

變色均勻

2.2橡膠負(fù)載的滅菌效果

生物指示劑不再具有生物活性，陽性對照具有生物活性。

2.3溫度參數(shù)

滅菌溫度為下限，上限為+3度。

2.4真空泄露

壓力上升速度不應(yīng)超過0.13kPa/min。

3.藥品生產(chǎn)驗證指南2003

3.1空載狀態(tài)熱分布

各測溫點間的溫差允許在±1度之內(nèi)。

3.2氣密性實驗

抽真空使內(nèi)室壓力為7kPa（或以下）關(guān)閉全部連接閥門，記錄時間與壓力，等待300秒，但不得超過600秒，讓滅菌器冷凝水汽化，然后記錄時間與壓力，600秒±10秒，再記錄一次，計算600秒內(nèi)的升壓速率。

4.空載熱分布測試

至少10個探頭（較大15-20），幾何中心和角落代表性，溫度傳感器及冷凝水放口放置，需進(jìn)行3次測試。

5.滿載熱分布和熱穿透實驗

進(jìn)行3次測試，明確裝載布置圖。

6.微生物挑戰(zhàn)性實驗

指示劑位置應(yīng)靠近溫度探頭的位置

7.呼吸器的評估完整性測試

8.再驗證

通常為12個月

再驗證監(jiān)控運行數(shù)據(jù)的資料回顧，以證明滅菌程序無偏離趨勢

這里說明下，再驗證涉及到的新名詞：工藝標(biāo)準(zhǔn)和工藝執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，后面會進(jìn)行詳解。

四、空腔負(fù)載實驗

藥品生產(chǎn)驗證指南2003

概況：對設(shè)備結(jié)構(gòu)，功能與操作進(jìn)行描述

生物指示劑選用121度濕熱滅菌采用嗜熱脂肪芽孢桿菌

F0值選擇過度熱殺F0值12；殘存概率F0值8，一般F0值12屬于有效殺滅。

空載狀態(tài)熱分布冷凝水排放口（一般冷點）放置一個熱電偶，運行3次。

裝載熱穿透實驗確定裝載方式下冷點，在最大和最小裝載下分別進(jìn)行。

生物指示劑驗證同GMP指南，提及滅菌前生物負(fù)荷檢查中未檢出耐熱孢子。

五、驗證流程

驗證前的URS(用戶需求標(biāo)準(zhǔn)）-FDS（功能標(biāo)準(zhǔn)）-DQ（設(shè)計確定）FAT（工程測試）IQ-OQ-PQ（安裝-運行-性能確認(rèn)）就不多說了，這是標(biāo)準(zhǔn)流程一個不能少。

以上標(biāo)準(zhǔn)流程做完后才是真正滅菌柜驗證的開始。

這里有個重點要畫下來，考試要考的，就是偏差管理，變更控制。

5.1工藝標(biāo)準(zhǔn)與工藝執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)

每一種產(chǎn)品為了達(dá)到有效的滅菌，最后設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)不一定就是工藝標(biāo)準(zhǔn)，在這里在引進(jìn)個說法叫工藝執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。

工藝執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)是為了達(dá)到工藝標(biāo)準(zhǔn)而根據(jù)產(chǎn)品情況和設(shè)備情況經(jīng)驗證得來的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。

這里要說明的是我們滅菌的實現(xiàn)是工藝標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)中定的，這個是變不了的。舉個例子來說比如說115度，30分鐘或者121度15分鐘，這個是不能變的，這是工藝標(biāo)準(zhǔn)。我們?yōu)榱诉@個工藝標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)我們產(chǎn)品特性和設(shè)備情況所做的結(jié)果，也就是說驗證出來的結(jié)果，我們設(shè)定的值，這個叫工藝執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。為了達(dá)到115度30分鐘的工藝滅菌標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)驗證得出我們需要在設(shè)備上設(shè)定115度32分鐘才能使滅菌器腔體內(nèi)所有的點都滿足工藝標(biāo)準(zhǔn)，因此在實際執(zhí)行中我們設(shè)定的滅菌器標(biāo)準(zhǔn)是115度32分鐘。

就像剛才舉的例子，只有在操作規(guī)程中說明按照工藝執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行操作，才能達(dá)到我們工藝標(biāo)準(zhǔn)的要求。工藝標(biāo)準(zhǔn)和工藝執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，這是兩個概念。

工藝執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)是為了達(dá)到工藝標(biāo)準(zhǔn)，而設(shè)定的一個標(biāo)準(zhǔn)，是我們實際操作的寫入SOP中的。但不是工藝規(guī)程和STP當(dāng)中的內(nèi)容。

工藝執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)是會變化的，所以再驗證就很主要了。要按時進(jìn)行在驗證或者根據(jù)設(shè)備及產(chǎn)品的情況進(jìn)行再驗證

而且工藝執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)是個變值，它會根據(jù)我們產(chǎn)品的不同以及我們設(shè)備連續(xù)使用的情況，或者使用年限而進(jìn)行一定量的變更或者是變化的，甚至包括我們設(shè)備更換零配件也會對工藝執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)生一定影響。

5.2BD試驗

在性能確認(rèn)中：BD測試目的為了測試?yán)淇諝馀欧判Ч淇諝獾拇嬖谥饕绊懹袃蓚€：一是純蒸汽參雜冷空氣影響熱穿透效果。二是滅菌器內(nèi)水分降低，影響殺滅效果。驗證進(jìn)行BD測試，證明其設(shè)計無誤，再驗證無需進(jìn)行。

5.3冷點位置

空載熱分布確定冷點位置，滅菌過程始終高于121度，計算極差值。

由于我們的這個基礎(chǔ)架構(gòu)能力和材料能力越來越好，對于現(xiàn)在的滅菌柜，這個冷點位置和以前會有不同，但這個冷水凝結(jié)的地方一定會對我們滅菌效果產(chǎn)生影響，而且冷水凝結(jié)的地方，一般的情況下是不會變的。

5.4裝載方式

滿載確定滿載量及擺放方式，作為日常負(fù)載依據(jù)。在滅菌的時候，如非必要千萬不要變更擺放方式。一旦變更擺放方式之后，我們一定要重新做驗證。因為在擺放邊方式變更的時候，絕對會對我們滿載熱穿透有很大的影響。

5.5生物指示劑試驗

確認(rèn)預(yù)定的滅菌程序能夠在產(chǎn)品滅菌后，微生物存活率＜10-6。

5.6脈動真空滅菌柜空載探頭布點原則

實際的探頭數(shù)量和布點位置只有一個目的，保證取樣點的代表性，能夠反饋出測試目標(biāo)的性能。

GMP指南內(nèi)容

至少10個探頭（較大15-20），幾何中心和角落代表性，溫度傳感器及冷凝水排放口放置。

5.7再驗證周期

1.儀表校正應(yīng)每季度進(jìn)行一次，或根據(jù)內(nèi)部有關(guān)校驗周期的規(guī)定進(jìn)行校驗。

2.微生物標(biāo)定物試驗應(yīng)每季度進(jìn)行一次。

3.熱分布試驗應(yīng)每年進(jìn)行一次。

任何重大變更（改變裝載狀態(tài)，改變滅菌時間等）或重大維修完成后，均要進(jìn)行驗證，以證明不同變更對已驗證的滅菌系統(tǒng)的滅菌效果沒有不良影響。

實際使用中可以根據(jù)自己品種及設(shè)備的情況制定相關(guān)要求

數(shù)據(jù)的匯總和分析也是比較重要的環(huán)節(jié)，更主要的是重現(xiàn)性！

最后給大家個公式有興趣的可以手動計算F0值，，計算公式：F0=ΔtΣ10(T－121)/10

公司背景介紹：

澤恒.華譜在計量校準(zhǔn)、驗證與確認(rèn)的優(yōu)勢是專注做生物制藥質(zhì)控服務(wù)，針對一些特殊的儀器都非常熟悉，核心團(tuán)隊來源于制藥公司和儀器廠家，對儀器和GMP法規(guī)都很熟悉，比如：我們團(tuán)隊專門研發(fā)了替代進(jìn)口的熒光定量PCR儀校準(zhǔn)裝置，大大降低熒光定量/定性PCR儀校準(zhǔn)的成本（遠(yuǎn)低于同行）；我們開發(fā)了細(xì)胞計數(shù)儀的校準(zhǔn)內(nèi)部規(guī)程；開發(fā)了細(xì)胞復(fù)蘇儀的內(nèi)部校準(zhǔn)規(guī)程；開發(fā)了凝膠電泳掃描儀的校準(zhǔn)規(guī)程；我們開發(fā)了溫度驗證所需要的超低溫和超高溫一體化無線探頭，降低用戶大量使用探頭時的成本，代替了進(jìn)口；這些例子還有很多，因為我們都是生物出身，所以我們關(guān)注每一個生物用戶工藝要求，在生物制藥儀器設(shè)備上面專注，“與質(zhì)量同行、做儀器設(shè)備質(zhì)控”，為了讓生物制藥更安全而努力。

我們在服務(wù)上與其它單位密切合作，包括強(qiáng)檢、特檢或做不了的都幫客戶代送代取，省時、省力、方便客戶。

澤恒.華譜是專注于為生物制藥行業(yè)提供實驗室儀器計量校準(zhǔn)、儀器設(shè)備驗證與驗證/廠房驗證的專業(yè)服務(wù)商。我們給制藥客戶解決的是一站式QC/QA/工程部/驗證部/生產(chǎn)部的質(zhì)控外包服務(wù)。